质粒中提试剂盒是一种用于从大肠杆菌等细菌中快速、高效提取中量质粒顿狈础的试剂盒,适用于多数细胞转染实验、文库筛选、体外翻译等常规分子生物学操作。
质粒中提试剂盒操作步骤(以常见试剂盒为例)
细菌收集:取5-30尘濒过夜培养的菌液,加入离心管中,使用常规台式离心机离心,尽量吸除上清。
细胞裂解:向有菌体沉淀的离心管中加入重悬液(如Solution I),悬浮细菌沉淀。然后加入裂解液(如Solution II),温和地上下翻转使菌体充分裂解。此时菌液应变得清亮粘稠。
中和与沉淀:加入中和液(如Solution III),立即温和地上下翻转充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。离心后,将上清液转移到吸附柱中。
DNA吸附与洗脱:将上清液加入吸附柱中,离心后弃废液。然后加入漂洗液(如DNA Wash Buffer)进行漂洗,以去除残留的杂质。最后,将吸附柱置于干净的离心管中,加入洗脱缓冲液(如Elution Buffer)进行洗脱,收集质粒DNA溶液。